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2024年06月03日
目前核酸藥物主要通過反相色譜或離子交換層析純化。
HPLC純化是一種高效、高純度的純化方法，其原理基于不同物質在固定相和流動相之間的分配差異。根據寡核苷酸的特性，可以選擇適合的色譜柱，如反相（RP-HPLC）或離子交換（IE-HPLC）色譜柱。對于RP-HPLC，固相中的疏水性能夠很好地結合含有5'-DMT保護基團的寡核苷酸，分離度更高，可實現更高的純度水平。
另一方面，離子交換層析，特別是陰離子交換層析，可以與帶負電荷的寡核苷酸結合。通過調整鹽的濃度和酸的使用，可以有效地去除雜質并分離目的寡核苷酸。但純化后的樣品可能還需要進行脫鹽和濃縮，以進一步提高寡核苷酸的純度和濃度。
結合疏水層析與離子交換層析也可以獲得高純度的原液，工藝步驟為：固相合成→疏水層析→脫三苯甲基化→離子交換→超濾/洗濾→原液。
